纽约自然博物馆重新开放，小保安赖瑞·戴利（本·斯蒂勒BenStiller饰）带领着泰迪·罗斯福（罗宾·威廉姆斯RobinWilliams饰）策划了一场精彩的揭幕演出。然而，不久之后，泰迪和猴子等博物馆的伙伴们陷入了混乱之中，整个会场都变得一片狼藉，让赖瑞非常头疼。事后，赖瑞发现回生黄金碑正被一种绿色的物质腐化，而这种情况似乎导致了其他藏品们的行为变得放荡不羁。赖瑞开始查找资料，他断定黄金碑背后隐藏着一个不为人知的机密。为了阻止混乱情况的进一步蔓延，赖瑞决定前往大英博物馆寻求法老王阿卡曼拉的父亲的帮助，尽管他身后跟着一群怪异的博物馆藏品。在前往博物馆的途中，他们遇到了圆桌骑士兰斯洛特爵士，并且与屋大维等伙伴失散了。久违的神秘冒险就在夜幕下的大英博物馆展开……
